常见ELISA 实验问题与解决方法

实验结果出现的几大类问题如下：
一、ELISA实验结果显色淡、 灵敏度偏低
可能原因与具体解决办法如下：
1、试剂盒在运输途中时间太长，温度太高
解决办法：尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温

2、试剂盒未充分平衡
解决办法：试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少
20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃） 。

3、培养箱温度不足37℃ 
解决办法：注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免
影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意

4、保温时间不足 
解决办法：校正定时钟准确定时

5、洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加
解决办法：按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数

6、移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁
解决办法：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁
要清洁，最好一次性使用

7、蒸馏水水质有问题 
解决办法：使用新鲜合格的蒸馏水

8、底物作用时间不足 
解决办法：准确定时

二、背景深全部呈有色
可能原因与具体解决办法如下：
1、洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留 
解决办法：
浓缩洗液准确配制；10倍浓缩洗涤液如有结晶则应让结晶于室温全部溶解后再量取稀释；充分洗涤，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染

2、样品污染
解决办法：
样品应新鲜采集，或低温保存，防止污染

3、培养箱温度超过37℃或反应时间过长 
解决办法：调整培养箱温度，准确定时

4、吸嘴重复使用，未洗净或消毒不彻底
解决办法：吸嘴尽可能一次性使用

5、蒸馏水被污染
解决办法：使用新鲜蒸馏水

6、酶等试剂混用 
解决办法：不同批号试剂勿混用

7、一次实验的标本量过多，加样时间太长， 导致实际反应时间延长
解决办法：合理安排实验，避免几块酶标板同时加样

三、重复性不佳
1、样品数量多少不一，加样时间有长有短    
解决办法：重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近

2、保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致

 解决办法：重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持
一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性

3、加样量不一致    
解决办法： 样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

四、出现白板阳性对照不显色
1、显色液变质     
解决办法：更换新的显色液

2、洗涤液配制有误   
解决办法： 请按说明书所示稀释倍数配制

3、未加酶结合物而认为已加入  
 解决办法： 注意不要漏加

4、终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用   

 解决办法： 每次加液前均应看清标签。

如需具体详细了解，可拨打咨询电话：021-60348467 进行咨询了解！